Лабораторная диагностика трихомониаза: обзор литературы

Что такое трихомониаз? Трихомонада – причина трихомониаза

Трихомониаз — это заболевание, передающееся половым путем (ЗППП), вызываемое подвижными паразитическими простейшими трихомонадами. Трихомониаз является наиболее распространенным заболеванием как в США, так и в других странах мира.

Высокая распространенность трихомониаза в сочетании с другими ЗППП сделали заболевание одной из наболевших проблем современного мирового здравоохранения. Влагалищная трихомониазная инфекция увеличивает риск передачи ВИЧ-инфекции у мужчин и женщин.

Трихомониаз также является причиной выкидышей, бесплодия, послеоперационных инфекций и неоплазии шейки матки.

Человек является единственным возможным носителем трихомониазной инфекции. Передача инфекции происходит при половом акте. Трихомонады содержатся в вагинальном секрете женщин и выделениях из уретры у мужчин. Ректальная форма распространения встречается достаточно редко, в основном это случается при гомосексуальных контактах.

У женщин трихомониазная влагалищная инфекция ограничивается областью влагалища, шейки матки, мочеиспускательного канала, мочевого пузыря и бартолиновых желез. У мужчин микроорганизм обитает в области уретры, наружных половых органов, предстательной железы, а также содержится в сперме.

Паразитические простейшие обитают на поверхности слизистых оболочек урогенительного тракта у мужчин. Специальные жгутики позволяют трихомонадам передвигаться по тканям уретры и влагалища.

Паразит разрушает эпителиальные клетки, выпуская специфический токсин – цитотоксическое вещество. В момент развития инфекции уровень рН влагалища возрастает, как и количество полиморфно-ядерных лейкоцитов (PMNs).

Эти клетки являются основными инструментами иммунной защиты. Они отвечают на хемотаксические вещества, выделяемые трихомонадами.

К сожалению, вырабатываемого иммунитета недостаточно для преодоления инфекции без лечения.

Симптомы трихомониаза у женщин и мужчин. Особенности проявления инфекции

Трихомонады — это микроскопические протозойные паразиты. Инфекция, вызванная микроорганизмом трихомонада (Trichomonada Vaginalis), называется трихомониаз.

  • Трихомониаз является очень распространённой инфекцией, передаваемой половым путём. Чаще встречается у женщин, чем у мужчин.
  • Женщины старше 35 лет чаще, чем молодые женщины заражаются трихомонадами.
  • У женщин наиболее часто поражаются нижние отделы генитального тракта (вульва, влагалище или уретра).
  • У мужчин наиболее часто поражается уретра.
  • Как я могу заразиться трихомонадой? Как передаётся трихомонада?

  • Трихомонады распространяются от инфицированного человека неинфицированному человеку во время секса.
    Секс — это введение пениса во влагалище, прямую кишку или в рот; и/или оральные ласки пениса, влагалища или прямой кишки.
  • Трихомонада, как правило, передаётся от полового члена во влагалище, или от влагалища к пенису, но она может также передаваться из одного влагалища в другое влагалище.
  • Инфекция чаще встречается у женщин и у мужчин, имевших много сексуальных партнёров.
  • Для трихомонады не характерно инфицировать руки, рот или прямую кишку.
  • Такие факторы, как возраст и общее состояние здоровья могут повлиять на проявление симптомов при инфицировании трихомонадой.
  • Заражённые люди без симптомов могут по-прежнему передавать инфекцию другим.
  • Люди, которые имели трихомониаз и получали лечение антибиотиками, могут заразиться снова, если они вступили в сексуальный контакт с человеком, инфицированным трихомонадами.
  • Причины заболевания

    Возбудителем трихомониаза является влагалищная трихомонада – простейший паразит, обитающий в мочеполовых трихомонада – возбудитель трихомониазаорганах. У женщин трихомонада обнаруживается во влагалище, так же возможно распространение заболевания на шейку матки и мочеиспускательный канал.

    У мужчин кроме мочеиспускательного канала поражаются предстательная железа и семенные пузырьки (развивается простатит). Инфекция может подниматься и выше, вызывая такие заболевания как цистит (воспаление мочевого пузыря) и пиелонефрит (заболевание почек).


    Трихомонады довольно долго сохраняют жизнеспособность в жидкой среде – в моче, в сперме, в воде они могут выживать до 24 часов; благодаря чему возможен и бытовой путь заражения. Поэтому трихомониаз считается очаговым заболеванием: довольно типичны случаи поражения трихомониазом людей, имеющих общий быт, – членов одной семьи, детей из одной группы детского сада и т.п.

    В организме человека трихомонады могут сохраняться годами, без проявления явных симптомов заболевания. Такое трихомонадоносительство более характерно для мужчин, чем для женщин.

    Возбудителем урогенитального трихомониаза является влагалищная трихомонада, которая относится к простейшим одноклеточным организмам. В организме человека живут еще ротовая и кишечная трихомонады, но трихомониаз вызывает только влагалищная. Трихомонады не устойчивы во внешней среде и при высушивании быстро погибают, но возможно сохранение их активности во влажной сфере (белье, мочалки, полотенца).

    В последние годы трихомониаз занимает лидирующие позиции среди других инфекций, передаваемых половым путем, по частоте встречаемости среди населения. Причина этого явления кроется в том, что заболевание очень легко переходит в хроническую форму: симптомы болезни сперва становятся размытыми, затем на какое-то время исчезают, и человек, ставший трихомонадоносителем, продолжает вести активную половую жизнь, заражая всех, кого встретит в своей постели.

    Чаще носителями становятся мужчины, поэтому своевременное излечение имеет значение не только для них, но и для потенциальных партнерш.

    Возбудителем этой болезни является представитель простейших микроорганизмов — влагалищная трихомонада. Это простое одноклеточное животное, которое хорошо себя чувствует везде, где присутствует плоский эпителий: во влагалище, в цервикальном канале (канале шейки матки), в матке и маточных трубах, а у мужчин — в мочеиспускательном канале и мочевом пузыре.

    Другие виды анализов

    Влагалищная трихомонада (вагинальный трихомоноз) - пути заражения ...

    Для выявления и диагностирования трихомониаза проводятся исследования различных сред человеческого организма. Полноценное обследование на трихомониаз может состоять из целого комплекса исследований:

    • световая микроскопия окрашенных или неокрашенных препаратов (мазка слизистых оболочек) на стекле;
    • бактериологический посев, культурное исследование мазка или соскоба с пораженных тканей в питательную среду для исследования состава микрофлоры;
    • ИФА (иммуноферментный анализ), позволяет выявить в крови специфические антитела к любым видам инфекционных возбудителей;
    • ПЦР-диагностика (полимеразная цепная реакция), предназначенная для выявления ДНК возбудителей инфекционных заболеваний.

    Наиболее эффективными считаются следующие виды лабораторных исследований: анализ мочи, бактериальный посев на трихомониаз, анализ крови, метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).

    Бактериальный посев (мазок)

    Анализ, в ходе которого берется биоматериал пациента и изучается под микроскопом на предмет выявления патогенных клеток, – это посев на трихомонады. Такое исследование в обязательном порядке проводится у всех пациентов:

    • С симптомами трихомониаза.
    • При наличии воспалительных процессов в мочеполовой сфере.
    • При планировании беременности.

    Объектом изучения при бакпосеве становятся образцы выделений из половых органов – у женщин биоматериал берут с задней стенки влагалища и канала шейки матки, у мужчин – из уретры. Забор материала при бакпосеве на возбудителя трихомониаза осуществляет врач-венеролог.

    Перед проведением процедуры назначают мероприятия, провоцирующие обострение реакции трихомонады.

    Накануне исследования больному рекомендуется принять небольшую дозу алкоголя или сделать инъекцию Пирогенала, повышающего температуру.

    Биоматериал, полученный с помощью мазка на возбудителя трихомониаза, помещают в специальную питательную среду, способствующую размножению микроорганизмов. Затем выполняют нативный мазок, размещая неокрашенную каплю биоматериала в теплый раствор хлорида натрия под предметным стеклом микроскопа. Таким образом устанавливается наличие трихомонады в мазке.

    Далее лаборант определяет чувствительность патогенов к определенным видам антибактериальных препаратов. Полученные сведения помогают врачу назначить адекватное лечение.

    Расшифровка анализа означает следующее: положительный результат – трихомониаз, отрицательный – отсутствие инфекции.

    Если результат анализа на трихомониаз с помощью мазка показал положительную реакцию, вероятность ошибки исключается. При отрицательном результате проводят повторную – контрольную – сдачу анализа. Если до сдачи анализа проводилось антибактериальное лечение, результаты исследования могут быть искажены и не соответствовать действительности.

    Несмотря на высокую точность исследования на трихомониаз, такая диагностика имеет существенный минус – обработка биоматериала и ожидание результатов занимают много времени.

    ПЦР – полимеразная цепная реакция

    К числу наиболее точных диагностических методов относится ПЦР на трихомонады. Особенно важно, что с помощью этого исследования можно:

    • Установить даже скрытую форму течения болезни.
    • Обнаружить сопутствующие инфекции.
    • Контролировать процесс лечения заболевания.
    • Выбрать оптимальные лекарственные препараты.

    Для получения диагностических сведений сдается моча или семенная жидкость. В лаборатории полученный биоматериал исследуют методом распознавания и многократного синтеза копий ДНК.

    Савичева А.М., Лабораторная диагностика урогенитального ...

    Расшифровка анализа: положительный результат означает констатацию трихомониаза, отрицательный – отсутствие инфекции. Результаты процедуры можно получить уже наследующий день.

    Исследование крови

    Дополнительную информацию о наличии инфекции и состоянии здоровья пациента позволяет получить анализ крови на антитела к трихомонаде (ИФА – иммуноферментный анализ). Антитела – иммуноглобулины различного типа – образуются в крови как ответ иммунной системы на возбудителя инфекции.

    При остром течении трихомониаза это иммуноглобулины G, при хронической или бессимптомной форме болезни – иммуноглобулины M. Исследование позволяет установить наличие и тип иммунных тел и диагностировать заболевание.

    Если расшифровка анализа показала наличие Ig G и IgM, то это подтверждает наличие возбудителя или свидетельствует о его недавнем присутствии. В норме данных антител в крови быть не должно.

    Данный анализ на трихомониаз не считается точным, так как при скрытой форме течения болезни малоэффективен.

    Сдавать кровь следует утром натощак. Учитывая, что кровь на ИФА будут брать из вены, перед процедурой не стоит принимать антибиотики. Кроме того, рекомендуется ограничить посещение туалета за 3 часа до анализа.

    Любые диагностические мероприятия способны обеспечить наибольшую эффективность только при комплексном проведении.

    От данных, полученных при исследовании, зависят не только постановка диагноза, но и способ лечения и его результат. Качественная диагностика – залог успешного выздоровления.

  • свежий трихомониаз: острая, подострая и торпидная (малосимптомная) формы;
  • хронический трихомониаз (давность заболевания 2 месяца и более или не установлена);
  • трихомонадоносительство (отсутствие симптомов при выявлении трихомонад во влагалище или в сперме).
  • Трихомониаз у мужчин: диагностика и лечение

    Оглавление

    Одним из наказаний богини Венеры за слишком насыщенную событиями и несколько беспорядочную половую жизнь может стать неприятное и очень распространенное заболевание — трихомониаз. Трихомониаз у мужчин — явление настолько частое, что многие представители сильного пола знают все его достоверные симптомы и даже основные способы лечения и с радостью делятся информацией с приятелями, попавшими в беду.

    Однако лучше не прибегать к советам таких венерологов-любителей, а разобраться в клинической картине и методах борьбы с этой болезнью самому.

    Передача возбудителя возможна только при непосредственном половом контакте, как считают современные венерологи. Если раньше многие придерживались версии о возможном контактно-бытовом пути передачи (полотенца, мочалки и т.п.), то теперь эта версия постепенно сходит на нет, так как доказано, что трихомонада крайне неустойчива во внешней среде.

    Симптомы трихомониаза

    Специфика жизнедеятельности Trichomonas vaginalis состоит в том, что она не вызывает ярко выраженной иммунной реакции организма. Поэтому после инфицирования недуг выявить практически не представляется возможным. Даже при длительном развитии трихомониаза его симптомы остаются невыраженными.

  • острая;
  • хроническая;
  • латентная (трихомонадоносительство).
  • У мужчин заражение начинается с поражения слизистой оболочки урерты. Выявить его практически невозможно, а риски для здоровья половой сферы оно несет существенные. Например, может пострадать репродуктивная функция. Также трихомониаз чреват такими серьезными осложнениями, как простатит, везикулит, эпидидимит.

    Проявления у женщин

    При острой и подострой формах трихомониаза женщины жалуются на обильные, пенистые бели с неприятным запахом, зуд и жжение в области наружных половых органов. Бели могут быть желтоватого или зеленоватого цвета.

    Диагностика

    Как и любое инфекционно-воспалительное заболевание, трихомониаз требует комплексного обследования и диагностики:

    • Общий анализ мочи при трихомониазе, как правило, показывает повышенную плотность и содержание белка. Кроме того, в моче обнаруживаются лейкоциты, как фактор воспалительного процесса. Также возможно обнаружение гиалиновых цилиндров и патогенной микрофлоры.
    • Общий анализ крови дает картину воспалительного процесса и показывает его степень. В крови обнаруживается нарушение лейкоцитарной формулы (лейкоцитоз), повышение уровня СОЭ.
    • Световая микроскопия урогенитального мазка — самый простой и быстрый метод диагностики. В процессе исследования окрашенного или неокрашенного мазка с пораженных тканей, он изучается под мощным микроскопом и можно увидеть возбудителя болезни. Для выявления трихомонады стекло с мазком окрашивается метиленовым синим раствором, после чего в темном пятне можно выявить микроорганизмы по характерной грушевидной форме и наличию жгутиков на капсуле. К недостатку этого метода относится тот факт, что при сложных комплексных инфекциях он не может дать полную развернутую картину заболевания.
    • Анализ мочи или спермы — это узкоспециализированное исследование (ПЦР-диагностика), позволяет выявить наличие возбудителя болезни даже на самом начальном этапе развития, сразу после заражения. В процессе исследования удается определить ДНК возбудителя даже в том случае, когда он присутствует в крови в крайне малом количестве. ПЦР — самое современное и точное исследование, эффективное как при простых формах патологии, так и при сложных, когда человек заражен комплексной инфекцией.
    • Иммуноферментный анализ крови на трихомониаз — также достаточно эффективный метод, который дает возможность выявить инфекцию по наличию в крови антител к определенным видам инфекционных возбудителей. Саму инфекцию при этом обнаружить нельзя, но по составу антител в крови специалист может судить о наличии воспалительного процесса, с которым борется иммунная система человека.

    Бактериологический культурный посев как метод выявления трихомониаза в последнее время применяется редко, чаще всего его назначают в том случае, когда нет технической возможности провести более точную диагностику.

    Проведение анализа на бакпосев мазка или соскоба имеет много условностей, которые необходимо соблюсти, чтобы получить точный результат. Так, например, у женщин не берут мазок во время и в течение нескольких дней после менструации.

    Мазок из уретры у мужчин и женщин берут только через определенное время после мочеиспускания. Если выделения из наружных половых органов слабые, то через два часа, если обильные — то через полчаса.

    Диагностика трихомониаза проводится с помощью методов лабораторной диагностики. Цель исследований – определить, какая именно инфекция вызвала заболевание. Это необходимо, чтобы правильно подобрать препараты для подавления её активности.

    Анализы на трихомониаз сдают все, кто обратился к гинекологу, урологу или венерологу с жалобами на зуд и жжение в мочевых или половых путях, выделения с запахом пропавшей рыбы, учащенное мочеиспускание.

    Мужчины должны сдать анализ, если наблюдается увеличение и болезненность при пальпации предстательной железы и яичек.

    Различия в клинической картине трихомониаза у мужчин и женщин

                    Пол Симптом                            МужчиныЖенщины
    Выделенияочень скудныеобильные
    Больв промежности, отдающая в прямую кишкулокализована в нижней части живота
    Эрозии, язвылокализуются на головке пенисамогут опускаться с гениталий на внутреннюю поверхность бедер

    Диагноз трихомониаза ставят на основании комплексного обследования пациента, включающего:

    • сбор жалоб больного;
    • данные осмотра;
    • лабораторную диагностику.

    Диагноз урогенитального трихомониаза устанавливается при обязательном обнаружении Trichomonas vaginalis путем лабораторного исследования.

    Методы диагностики трихомониаза:

    • исследование нативного препарата;
    • исследование препарата, окрашенного 1% раствором метиленового синего или бриллиантового зеленого и по Граму ;
    • культуральное исследование.

    1) исследование нативных препаратов

    Наиболее широко распространенным, но недостаточно чувствительным методом при лабораторной диагностике трихомониаза является микроскопическое изучение нативных или окрашенных препаратов. При исследовании нативного препарата патологический материал помещают в каплю теплого изотонического раствора хлорида натрия на предметном стекле, тщательно перемешивают, накрывают покровным стеклом и немедленно исследуют в микроскопе с объективом 40.

    Лучшие результаты дает просмотр нативного препарата в микроскопе с темнопольным конденсором, т. к. при этом обнаруживаются единичные и слабоподвижные особи в скоплениях клеточных элементов за счет хорошо видимого движения жгутиков. В нативном препарате для трихомонад характерна овальная или округлая форма, наличие жгутиков и толчкообразные движения простейших.

    При исследовании нативных препаратов следует помнить о возможности нахождения в моче жгутиковых простейших семейства бодонидов. В отличие от трихомонад они обладают меньшим размером и имеют лишь два жгутика, что обусловливает их быстрое поступательное движение по прямой.

    К ошибкам в распознавании трихомонад может привести и наличие в препарате лейкоцитов в сочетании с большим числом хорошо подвижных палочек, прикрепляющихся к ним.

    2) метод окрашивания

    С целью обнаружения влагалищных трихомонад в окрашенных препаратах используют многочисленные методы окраски, в частности метиленовым синим, генцианом фиолетовым, по способам Грама, Романовского-Гимза, Лейшмана-Романовского и др.

    Широкое применение метиленового синего обусловлено тем, что его используют и для окраски мазков на гонококк. Изучение окрашенных мазков позволяет определить морфологию возбудителя, мазки не требуют немедленного исследования, что особенно важно при массовом обследовании на трихомониаз.

    Однако возможны диагностические ошибки, поскольку эпителиальные клетки могут быть приняты за трихомонады.

    3) культуральное исследование

    Культуральный метод диагностики трихомониаза является более достоверным и чувствительным по сравнению с микроскопическим исследованием. В большей степени его эффективность зависит от качества используемых питательных сред. В состав предложенных сред с высокими ростовыми свойствами входят мясо-пептонный бульон (МПБ), препараты печени, минеральные соли, сахара, сыворотка крови человека или животных, соляно-кислый цистеин и другие ингредиенты.

    На данный момент одним из наиболее достоверных современных методов исследования на трихомониаз и другие мочеполовые инфекции является биорезонансная диагностика

    Для постановки диагноза урогенитального трихомониаза помимо клинических данных необходимо выявление Т. vaginalis.

    Лабораторная диагностика играет важную роль также при обследовании выздоравливающих и трихомонадоносителей. Заключение об излечении больного может быть сделано лишь на основании трехкратного исследования с отрицательным результатом.

    Основными методами лабораторной диагностики трихомониаза являются микроскопический и культуральный.

    Микроскопический метод. У мужчин проводится микроскопическое исследование отделяемого из уретры, центрифугата свежевыпущенной мочи, тотального выжима из придаточных половых желез.

    При заборе материала необходимо предварительно сухой салфеткой удалить выделения (если они есть) и протереть слизистую головки полового члена тампоном, смоченным в изотоническом растворе хлорида натрия.

    Соскоб с уретры забирают ложечкой Фолькмана с глубины 5-7 см.

    У женщин исследуется отделяемое из уретры, канала шейки матки и осадок мочи. Материал берут ложечкой Фолькмана из уретры на глубине 1-3 см, а также со слизистой заднего свода влагалища и из шейки матки.

    В течение суток до взятия материала на исследование женщины не должны делать спринцеваний, а мужчинам следует воздерживаться от мочеиспусканий в течение 3-4 ч до анализа.

    Паразитологическая диагностика трихомониаза производится путем изучения нативных мазков, препаратов, окрашенных различными красителями и специальными методами микроскопии.

    Нативный мазок. На предметное стекло наносят каплю теплого изотонического раствора хлорида натрия или раствора Рингера-Локка и смешивают с ним исследуемый материал.

    Мазки накрывают покровным стеклом и микроскопируют немедленно после приготовления препарата (объектив 40х, окуляр 7х или 10х). В положительных случаях в мазках обнаруживаются трихомонады грушевидной, овальной или округлой формы.

    По величине они несколько больше лейкоцита. Для подвижных форм характерны толчкообразные движения ундулирующей мембраны и жгутиков, которые особенно хорошо видны при исследовании в микроскопе с темнопольным конденсором.

    Этих простейших необходимо дифференцировать от представителей семейства Bodonidae, имеющих 2 жгутика и очень быстро двигающихся по прямой. К ошибкам может приводить также наличие в препарате подвижных бактерий, которые, прикрепляясь к лейкоцитам, создают иногда ложное впечатление большого количества подвижных трихомонад.

    При комнатной температуре в изотоническом растворе натрия хлорида трихомонады в течение 2-3 часов теряют подвижность, поэтому исследование необходимо проводить немедленно по поступлении материала.

    Для лучшего выявления трихомонад целесообразно производить параллельные исследования нативных мазков и окрашенных препаратов.

    Исследуемый материал равномерно наносится тонким слоем на предметные стекла. У женщин материал, взятый из уретры, равномерно размазывают на одной половине стекла в виде продольных полос, а из шейки матки — в виде круга на второй половине стекла. Затем производится окрашивание препаратов.

    1. Препараты, окрашенные метиленовым синим.

    Мазок, высушенный на воздухе, фиксируется в течение 3 мин в 96% этиловом спирте, высушивается, затем на него на 1 мин наносится 1 % раствор метиленового синего. Оставшийся краситель смывают под струей холодной воды, мазок высушивают.

    При микроскопии с иммерсией (объектив 90х, окуляр 7х или 10х) наблюдаются округлой, овальной формы трихомонады, расположенные в слизи между клеточными элементами. Четко просматривается оболочка паразитов, эксцентрично расположенное ядро, интенсивно окрашенное в синий цвет; протоплазма нежная, сетчатая, светлосиняя; вакуоли бесцветные.

    2. Препараты, окрашенные эозином и метиленовым синим рекомендуется приготовлять при исследовании материала, взятого у детей.

    Без предварительной фиксации препараты погружают в 1 % раствор зозина на 15-20 с, тщательно промывают струей холодной воды и заливают 1 % раствором метиленового синего на 1-2 мин, затем вновь промывают и высушивают.

    В этом препарате четко просматривается оболочка трихомонад, ядра их окрашены в синий цвет, а цитотоплазма светло-синяя с легкой сетчатостью; вакуоли бесцветные. Ядра клеток тканей окрашиваются в синий, а протоплазма — в голубой цвет разной интенсивности.

    Бактериальная флора имеет синий цвет.

    3. Препараты, окрашенные бриллиантовым зеленым рекомендуется использовать при отсутствии метиленового синего.

    Препарат фиксируют в течение 3 мин в 96 % этиловом спирте, высушивают, затем на 1 мин. наносят 0,5 % водный раствор бриллиантового зеленого, тщательно смывают краситель струей холодной воды и высушивают.

    При микроскопии видны урогенитальные трихомонады, расположенные между клеточными элементами. Четко просматривается их оболочка, эксцентрично расположенное ядро, окрашенное в интенсивный зеленый цвет; цитоплазма сетчатая, светло-зеленого цвета, вакуоли бесцветные.

    Бактериальная флора окрашивается в зеленый цвет разной интенсивности.

    4. Препараты, окрашенные по модифицированному способу Грама.

    Препарат покрывают полоской фильтровальной бумаги и заливают 1 % водным раствором кристаллического фиолетового на 1 мин (не должно быть пузырьков воздуха между бумагой и стеклом). Бумагу снимают, препарат промывают водопроводной водой и на несколько секунд (до почернения мазка) заливают раствором Люголя.

    Остаток его смывают, препарат обесцвечивают в 96 % этиловом спирте, поочередно вынимая и погружая его в спирт до тех пор, пока с тонких участков препарата перестанут стекать фиолетовые струйки и он примет бледно-серый оттенок.

    Затем препарат промывают водой и окрашивают в течение 3 мин 1 % водным раствором нейтрального красного. После этого препарат вновь промывают и высушивают.

    Правильно окрашенный препарат при просмотре под микроскопом на тонких участках имеет оранжево-красный цвет, а на толстых — лилово-фиолетовый. Ядра клеточных элементов (лейкоцитов, эпителиальных клеток) в центре имеют фиолетовый, а на периферии — оранжево-красный цвет.

    Высокое качество окраски обеспечивается своевременным прекращением обесцвечивания препарата. Урогенитальные трихомонады окружены тонкой, четко видимой оболочкой, ядро их сиреневого или фиолетового цвета; протоплазма окрашена в бледный оранжево-красный цвет, с легкой сетчатостью; жгутики и ундулирующая мембрана не просматриваются.

    Окрашенные препараты позволяют одновременно диагностировать гонорею и трихомониаз. При просмотре окрашенных мазков необходимо обращать внимание на скопление лейкоцитов на поверхности эпителиальных клеток как вспомогательный признак наличия трихомонад.

    Этот признак наблюдается довольно часто, но не учитывается врачами-лаборантами, а в руководствах по лабораторным методам исследования о нем практически не сообщается. Еще одним косвенным признаком урогенитального трихомониаза можно также считать наличие большого количества слизи в исследуемом материале.

    Исследование окрашенных мазков может повышать процент выявления урогенитальных трихомонад за счет учета подвижных и неподвижных особей, в то время как при исследовании нативных препаратов неподвижные особи часто не учитываются.

    Если в окрашенных мазках наблюдается большое количество сегментоядерных нейтрофилов при незначительном количестве бактериальной флоры, необходимо провести исследование на хламидиоз и микоплазмоз.

    5. Метод фазово-контрастной микроскопии.

    Дает возможность обнаруживать живых малоконтрастных урогенитальных трихомонад в неокрашенном виде. Паразиты различимы даже тогда, когда они совсем неподвижны.

    Метод позволяет с предельной четкостью различать не только движения, но и структуру трихомонад: жгутики, ундулирующую мембрану, аксостиль и др. Для окраски нативных препаратов при фазовоконтрастной микроскопии иногда применяется 0,1 % раствор сафронина.

    При этой окраске трихомонады сохраняют движения и лучше выделяются среди форменных элементов.

    6.Метод люминесцентной микроскопии. Метод основан на микроскопии светящегося в ультрафиолетовых лучах объекта в темном поле. Если собственная (первичная) люминесценция материала незначительна, то применяют люминофоры (акридиновый оранжевый и др.), которые, взаимодействуя с объектом, образуют светящиеся комплексы.

    Высушенный мазок, взятый для поисков трихомонад, можно длительно хранить в темном месте, а перед исследованием на него необходимо нанести несколько капель раствора акридинового оранжевого (1:40 000 в буферном растворе с рН 7).

    На мазок с краской накладывают покровное стекло, а избыток жидкости отсасывают фильтровальной бумагой, после чего мазок исследуют под люминесцентным микроскопом. Цитоплазма урогенитальных трихомонад обычно окрашивается в кирпично-красный цвет,а иногда — в желто-коричневый.

    Ядро овальной формы, светится зеленым или желто-оранжевым цветом. По размеру трихомонады крупнее лейкоцитов, но более мелкие, чем клетки плоского эпителия.

    При помощи люминесцентной микроскопии удается выявить неподвижные и безжгутиковые формы урогенитальных трихомонад, которые при обычном микроскопировании трудно отличить от лейкоцитов и эпителиальных клеток.

    Однако необходимо отметить, что у ряда больных в обычном нативном препарате обнаруживают подвижные трихомонады, в то время как при люминесцентной микроскопии они определяются с большим трудом. Сравнительные исследования не показали значительного преимущества люминесцентной микроскопии перед обычной.

    Тем не менее одновременное использование обоих методов улучшает диагностику трихомонадных заболеваний, особенно у мужчин. Благодаря эксцентрично расположенному зеленоватому ядру и окрашенной в кирпично-красной цвет цитоплазме трихомонад почти невозможно спутать с другими клетками.

    При использовании микроскопического метода трихомонады выявляются в большинстве случаев урогенитального трихомониаза. При хронических, процессах и при трихомонадоносительстве, наряду с трихомонадами, обнаруживается разнообразная микрофлора.

    Необходимо принимать во внимание возможность обнаружения трихомонад в виде атипичных округлых, слабоподвижных и неподвижных форм, иногда без жгутиков и ундулирующей мембраны. У женщин в мазках со слизистой влагалища и шейки матки возможно выявление отдельных ядер трихомонад.

    Выявление таких ядер и атипичных форм свидетельствует о наличии урогенитального трихомониаза.

    Культуральный метод . Применяется в случаях атипичной клинической картины, при хроническом течении заболевания, выявлении трихомонадоносителей и для установления выздоровления больных.

    Для культивирования трихомонад используется большое количество жидких и плотных питательных сред. Из первых наиболее часто применяются среды СКДС, СГДС и 199-СДС.

    Среда СКДС (среда с гидролизатом казеина, дрожжевым аутолизатом и сывороткой крови).

    — 100 мл солевого раствора следующего состава: натрия хлори-

    да 6,5 г, калия хлорида 0,14 г, кальция хлорида 0,12 г,

    натрия бикарбоната 0,2 г, 0,2 % раствора метиленового

    синего 05 мл, дистиллированной воды до 1 л;

    — 10 мл гидролизата казеина;

    — 10 мл дрожжевого аутолизата;

    — 30 мл сыворотки крови крупного рогатого скота без консерванта;

    — пенициллина и стрептомицина по 100 000 ЕД.

    При отсутствии гидролизата казеина рекомендуется использовать среду СГДС, содержащую 10 мл 5 % раствора гемогидролизата для культур тканей. Остальные ингредиенты берут в тех же количествах, как и в среде СКДС.

    Среда 199-СДС (в модификации Ю.Ф.Захаркива)

    — 100 мл солевого раствора: натрия хлорида 6,5 г, калия хлорида 0,14 г, кальция хлорида 0,12 г, натрия бикарбона-

    та 0,2 г, дистиллированной воды до 1 л;

    — 20 мл сыворотки крови крупного рогатого скота без консерванта (или сыворотки эмбрионов телят);

    — 20 мл среды 199 для культур тканей;

    — 10 мл 20 % раствора мальтозы;

    — 200 мг солянокислого цистеина;

    — по 0.5 мл 5% раствора пиридоксина гидрохлорида и 6% раствора тиамина бромида;

    — ампициллина 125000 ЕД и гентамицина 40000 ЕД.

    Указанные среды разливают в стерильные пробирки по 5 мл, заливая их слоем стерильного вазелинового масла толщиной 5 мм. Посев производят, помещая исследуемый материал при помощи пастеровской пипетки на дно этих пробирок.

    Урогенитальные трихомонады на 3-5-й день после посева дают придонный рост в виде плотного беловатого осадка, из которого пастеровской пипеткой берут материал для исследования в нативном мазке. При микроскопии видны одиночные трихомонады и их скопления; у отдельных их особей отмечаются активные движения жгугиков и ундулирующей мембраны.

    В случае отрицательных результатов исследование повторяют на 7-9-й и 11-17-й день после посева.

    Среду 199-СДС (с модификациями) целесообразно также применять при оценке чувствительности трихомонад к противопротозойным препаратам методом серийных разведений в жидкой среде. Учет результатов проводится на 3 и 5 день после посева.

    Для получения чистых культур урогенитальных трихомонад без применения антибиотиков рекомендуются различные плотные питательные среды. На таких средах трихомонады хорошо сохраняют свои морфологические признаки.

    Серологические методы. Используются как вспомогательные, Низкая иммуногенность и наличие различных серотипов урогенитальных трихомонад затрудняют получение достоверных результатов в диагностике.

    Серологические реакции иногда бывают отрицательными даже в случаях, когда выявлен возбудитель. Достоинством серологического метода является то, что серологические реакции остаются положительными в течение 1 года после излечения трихомониаза, что очень важно для ретроспективной диагностики.

    Результаты серологических реакций зависят от степени соответствия антигенной структуры штамма, вызвавшего заболевание, и штамма, использованного для приготовления диагностической сыворотки.

    Для серологической диагностики урогенитального трихомониаза используются реакции агглютинации, связывания комплемента (РСК), реакция непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ), иммуноферментный анализ (ИФА) и ускоренная реакция иммунофлюоресценции (РИФ-40).

    В РИФ-40 в качестве антигена используют урогенитальные трихомонады из 20-30 штаммов, выращенных на жидкой питательной среде в течение 2-3 сут. После промываний готовый антиген наносится на предметные стекла, куда добавляется инактивированная испытываемая сыворотка крови, разведенная в 40 раз бессолевым мясопептонным бульоном (рН 7), приготовленным из говяжьего мяса с повышенным содержанием (1,5 %) пептона.

    РИФ-40 успешно применяется при диагностике бессимптомного трихомониаза, трихомонадоносительства и для определения этиологии неспецифических воспалительных заболеваний мочеполовых органов.

    Микробиологический метод определения ферментативной активности трихомонад. основанный на их способности разлагать глюкозу, мальтозу, крахмал и гликоген с образованием кислоты и газа, не получил широкого распространения, поскольку ферментативная активность урогенитальных трихомонад оказалась весьма вариабельной.

    На правах рукописи

    Павел Геннадьевич

    14.03.10 – клиническая лабораторная диагностика

    АВТОРЕФЕРАТ

    диссертации на соискание ученой степени

    кандидата медицинских наук

    Санкт-Петербург – 2012

    https://www.youtube.com/watch?v=ZGsJLl0TIOo

    Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
    Adblock
    detector